GL Sciences / Titansphere

Titansphere

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Die Protein Phosphorylierung ist ein fundamentaler Prozess und beeinflusst die Zelldifferenzierung, -wachstum und -migration. Phosphorylierte Proteine zu analysieren ist jedoch durch die geringen Konzentrationen und die geringe Ionisierungseffizienz in MS Analysen sehr kompliziert. Daher ist es wichtig die phosphorylierten Proteine aufzukonzentrieren und die nicht-phosphorylierten Proteine zu reduzieren, um die Analyse von Proteindigest Untersuchungen mittels LC/MS zu verbessern.

Die Titansphere Produkte von GL-Sciences wurden speziell für diese Anwendung entwickelt. Dabei sind die Titansphere Produkte effizienter als die IMAC (Immobilized metal affinity chromatography) Aufarbeitung, wobei beide Methoden für eine optimales Ergebnis kombiniert werden können. Die Phosphat Gruppe eines Proteins wird auf der Oberfläche der Titansphere Partikel unter aziden Bedingungen absorbiert und unter basischen eluiert. Nicht phosphorylierte Protein absorbieren nicht und werden somit nicht zurückgehalten. Dadurch kann die Aufreinigung unter sauren Bedingungen stattfinden. Für die unterschiedlichen Anwendungen steht das Titansphere Material ist als Bulk erhältlich. Die weiterentwickelte Form Titansphere Phos-TiO ist sowohl als Bulk als auch als Spin Tips und Titansphere Phos-TiO MP Kit verfügbar.

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####MAGENTO-CATEGORY-PRODUCTS####

Technische Daten

Titansphere Bulkmaterial

Beschreibung

Titansphere TiO

Partikelgröße

5, 10 µm

Partikelform

Spherical

Absorptionspunkt

Titandioxid Kristalle

Porengröße

100 Å

pH Bereich

2.0 - 12.0

Beschreibung

Partikelgröße

Menge

Art. Nr.

Titansphere TiO

5 µm

500 mg

5020-75000

Titansphere TiO

10 µm

500 mg

5020-75010

Titansphere Phos-TiO Bulkmaterial

Beschreibung

Partikelgröße

Menge

Art. Nr.

Titansphere Phos-TiO Bulk

10 µm

500 mg

5010-21315

Titansphere Phos-TiO Kit

Beschreibung

5010-21309

5010-21310

5010-21311

5010-21312

Titansphere Phos-Tio Kit

24 pcs

96 pcs

24 pcs

96 pcs

Titansphere Sorbent Masse/Tip Volumen

1mg/10µl

1mg/10µl

3mg/200µl

3mg/200µl

Spin Tip Menge

24 pcs

96 pcs

24 pcs

96 pcs

Abfall Tube Menge

24 pcs

96 pcs

24 pcs

96 pcs

Recovery Tube Menge

24 pcs

96 pcs

24 pcs

96 pcs

Anleitung

1 pc

1 pc

1 pc

1 pc

Titansphere Phos-TiO MP Kit

Artikel-Nr.:

5010-21282

5010-21283

Titansphere Phos-TiO MP Kit

24 pcs

24 pcs

Titansphere Sorbent Mass/Tip Volume

1 mg / 200 μL

3 mg / 200 μL

Spin Tip Quantity

24 pcs (6 x 4 packs)

24 pcs (6 x 4 packs)

Waste Fluid Tube Quantity

24 pcs

24 pcs

Recovery Tube (2.0 mL) Quantity

24 pcs

48 pcs

Recovery Tube (1.5 mL) Quantity

48 pcs

48 pcs

Solution B (Lactic acid) Quantity

2 mL

2 mL xb14

Instruction Manual

1/pk

1/pk

Titansphere Phos-TiO MP Kit Protokoll

Applikationen

Effiziente Aufreinigung von HeLa Cell Lysat mit Titansphere TiO

Das HeLa Cell Lysat besteht hauptsächlich aus nicht phosphorylierten Peptiden. Titansphere TiO zeigt eine ausgezeichnete Selektivität. 90% der gebundenen Peptide sind phosphoryliert. 

Probe: HeLa Cell Lysat, 5µg

Titansphere TiO: 1mg

Vergleich Titansphere TiO mit IMAC

Im Vergleich mit der IMAC Methode zeigt Titansphere TiO eine wesentlich höhere Kapazität und eine deutlich höhere Anzahl an isolierten Phosphopeptiden.

Probe: Arabidopsis Cell Extrakt, 100µg

Titansphere TiO: 1mg

Vergleich von Titansphere Tio Bulk und Titansphere Phos-TiO Kit

Für das Titansphere Phos-Tio Kit wird das optimierte Titansphere Phos-TiO Bulkmaterial verwendet. Das Phos-TiO Material wurde mit Hinsicht auf eine bessere Absorption und Kapazität von Phosphopeptiden entwickelt. Dabei zeigt das Titansphere Phos-TiO Kit eine 2.6 mal höhere Peakfläche und 1.6 mal mehr identifizierte Phosphopeptide.

Probe: HeLa Cell Lysat, 50µm

Titansphere Media: 1mg

Produkt

Phosphoryliert

Nicht Phosphoryliert

Titansphere Phos-TiO Kit

996

185

Titansphere TiO Bulk

635

71

Neue TiO2-HAMMOC Methode vs. SIMAC Methode mit dem Titansphere Phos-TiO MP Kit

Die Arbeitsgruppe um Wakabayashi et al. (2015) hat die hoch effiziente Wiedergewinnung von einfach und mehrfach phosphorylierten Peptiden an Hand von HeLa Zellen 100µg im Gegensatz zur Sequential Elution from IMAC (SIMAC) Methode gezeigt.

Durch den Gebrauch von basischen Elutionspuffern können mehrfach phosphorylierte Peptide wiedergewonnen werden. 

Wakabayashi M, Kyono Y, Sugiyama N, Ishihama Y (2015): Extended coverage of singly and multiply phosphorylated peptides from a single titanium dioxide microcolumn. Analytical Chemistry 87 (20), 10213-10221.

Fazit

Das neue Titansphere Phos-TiO MP Kit ermöglicht eine höhere Wiedergewinnung von einfach und mehrfach phosphorylierten Peptiden. Dadurch kann eine Ionensuppression bei der anschließenden LC-MS/MS Detektion verringert werden. Dieses Kit zeigt höhere Kapazitäten für phosphorylierte Proteine und Peptide als das vorherige Titansphere Phos-TiO Kit.

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Broschüren

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