GL Sciences / Titansphere
Titansphere
Die Protein Phosphorylierung ist ein fundamentaler Prozess und beeinflusst die Zelldifferenzierung, -wachstum und -migration. Phosphorylierte Proteine zu analysieren ist jedoch durch die geringen Konzentrationen und die geringe Ionisierungseffizienz in MS Analysen sehr kompliziert. Daher ist es wichtig die phosphorylierten Proteine aufzukonzentrieren und die nicht-phosphorylierten Proteine zu reduzieren, um die Analyse von Proteindigest Untersuchungen mittels LC/MS zu verbessern.
Die Titansphere Produkte von GL-Sciences wurden speziell für diese Anwendung entwickelt. Dabei sind die Titansphere Produkte effizienter als die IMAC (Immobilized metal affinity chromatography) Aufarbeitung, wobei beide Methoden für eine optimales Ergebnis kombiniert werden können. Die Phosphat Gruppe eines Proteins wird auf der Oberfläche der Titansphere Partikel unter aziden Bedingungen absorbiert und unter basischen eluiert. Nicht phosphorylierte Protein absorbieren nicht und werden somit nicht zurückgehalten. Dadurch kann die Aufreinigung unter sauren Bedingungen stattfinden. Für die unterschiedlichen Anwendungen steht das Titansphere Material ist als Bulk erhältlich. Die weiterentwickelte Form Titansphere Phos-TiO ist sowohl als Bulk als auch als Spin Tips und Titansphere Phos-TiO MP Kit verfügbar.
| Beschreibung | Titansphere TiO |
| Partikelgröße | 5, 10 µm |
| Partikelform | Spherical |
| Absorptionspunkt | Titandioxid Kristalle |
| Porengröße | 100 Å |
| pH Bereich | 2.0 - 12.0 |
| Beschreibung | Partikelgröße | Menge | Art. Nr. |
| Titansphere TiO | 5 µm | 500 mg | 5020-75000 |
| Titansphere TiO | 10 µm | 500 mg | 5020-75010 |
| Beschreibung | Partikelgröße | Menge | Art. Nr. |
| Titansphere Phos-TiO Bulk | 10 µm | 500 mg | 5010-21315 |
| Beschreibung | 5010-21309 | 5010-21310 | 5010-21311 | 5010-21312 |
| Titansphere Phos-Tio Kit | 24 pcs | 96 pcs | 24 pcs | 96 pcs |
| Titansphere Sorbent Masse/Tip Volumen | 1mg/10µl | 1mg/10µl | 3mg/200µl | 3mg/200µl |
| Spin Tip Menge | 24 pcs | 96 pcs | 24 pcs | 96 pcs |
| Abfall Tube Menge | 24 pcs | 96 pcs | 24 pcs | 96 pcs |
| Recovery Tube Menge | 24 pcs | 96 pcs | 24 pcs | 96 pcs |
| Anleitung | 1 pc | 1 pc | 1 pc | 1 pc |
| Artikel-Nr.: | 5010-21282 | 5010-21283 |
| Titansphere Phos-TiO MP Kit | 24 pcs | 24 pcs |
| Titansphere Sorbent Mass/Tip Volume | 1 mg / 200 μL | 3 mg / 200 μL |
| Spin Tip Quantity | 24 pcs (6 x 4 packs) | 24 pcs (6 x 4 packs) |
| Waste Fluid Tube Quantity | 24 pcs | 24 pcs |
| Recovery Tube (2.0 mL) Quantity | 24 pcs | 48 pcs |
| Recovery Tube (1.5 mL) Quantity | 48 pcs | 48 pcs |
| Solution B (Lactic acid) Quantity | 2 mL | 2 mL xb14 |
| Instruction Manual | 1/pk | 1/pk |
Das HeLa Cell Lysat besteht hauptsächlich aus nicht phosphorylierten Peptiden. Titansphere TiO zeigt eine ausgezeichnete Selektivität. 90% der gebundenen Peptide sind phosphoryliert.
Probe: HeLa Cell Lysat, 5µg
Titansphere TiO: 1mg
Im Vergleich mit der IMAC Methode zeigt Titansphere TiO eine wesentlich höhere Kapazität und eine deutlich höhere Anzahl an isolierten Phosphopeptiden.
Probe: Arabidopsis Cell Extrakt, 100µg
Titansphere TiO: 1mg
Für das Titansphere Phos-Tio Kit wird das optimierte Titansphere Phos-TiO Bulkmaterial verwendet. Das Phos-TiO Material wurde mit Hinsicht auf eine bessere Absorption und Kapazität von Phosphopeptiden entwickelt. Dabei zeigt das Titansphere Phos-TiO Kit eine 2.6 mal höhere Peakfläche und 1.6 mal mehr identifizierte Phosphopeptide.
Probe: HeLa Cell Lysat, 50µm
Titansphere Media: 1mg
| Produkt | Phosphoryliert | Nicht Phosphoryliert |
| Titansphere Phos-TiO Kit | 996 | 185 |
| Titansphere TiO Bulk | 635 | 71 |
Die Arbeitsgruppe um Wakabayashi et al. (2015) hat die hoch effiziente Wiedergewinnung von einfach und mehrfach phosphorylierten Peptiden an Hand von HeLa Zellen 100µg im Gegensatz zur Sequential Elution from IMAC (SIMAC) Methode gezeigt.
Durch den Gebrauch von basischen Elutionspuffern können mehrfach phosphorylierte Peptide wiedergewonnen werden.
Wakabayashi M, Kyono Y, Sugiyama N, Ishihama Y (2015): Extended coverage of singly and multiply phosphorylated peptides from a single titanium dioxide microcolumn. Analytical Chemistry 87 (20), 10213-10221.
Das neue Titansphere Phos-TiO MP Kit ermöglicht eine höhere Wiedergewinnung von einfach und mehrfach phosphorylierten Peptiden. Dadurch kann eine Ionensuppression bei der anschließenden LC-MS/MS Detektion verringert werden. Dieses Kit zeigt höhere Kapazitäten für phosphorylierte Proteine und Peptide als das vorherige Titansphere Phos-TiO Kit.
Gl Sciences Titansphere Phos-TiO MP Kit Brochure
GL Sciences Bioanalysis Catalogue
GL Sciences Phosphepeptide Purifying & Enrichment Products Brochure